2020版《中國(guó)藥典》 已經(jīng)正式公布，新修訂的《0212藥材和飲片檢測(cè)通則》增加了33種禁用農(nóng)藥清單列表，且在《2341農(nóng)藥殘留測(cè)定法》中新增的“第五法”明確了其檢測(cè)方法。

 

       譜育科技創(chuàng)新研發(fā)了“中藥農(nóng)殘檢測(cè)利器” EXPEC 5250 GC/LC-TQMS，一機(jī)雙用，實(shí)現(xiàn)了高端分析儀器的重大突破，這款顛覆性的產(chǎn)品一經(jīng)發(fā)布便受到中藥飲片企業(yè)的熱情追捧，同時(shí)也聽見了行業(yè)不同的聲音。

       此次，譜育科技以GC/LC-TQMS檢測(cè)氯唑磷為例，詳細(xì)介紹如何建立LC-MS/MS檢測(cè)方法和評(píng)價(jià)儀器檢測(cè)能力。

 

       方法解讀一：

       禁用農(nóng)藥的限值和對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度建立

       在2020版《中國(guó)藥典》中對(duì)氯唑磷的限值要求是0.01mg/kg即10ng/g。

       采取直接提取法制備：稱取試樣5g（過三號(hào)篩），經(jīng)過提取后最終乙腈定容到10ml，則樣品基質(zhì)濃度為0.5g/ml，當(dāng)試樣中氯唑磷含量在限值時(shí)，供試品中氯唑磷的濃度為5ng/ml。

       采取快速樣品處理法（QuEChERS）制備時(shí)：稱取試樣3g（過三號(hào)篩），最終以15ml乙腈提取，取5ml氮吹至1ml，則樣品基質(zhì)濃度為1g/ml，當(dāng)試樣中氯唑磷含量在限值時(shí)，供試品中氯唑磷的濃度為10ng/ml。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，限值濃度置于標(biāo)準(zhǔn)曲線中間點(diǎn)時(shí)，方法的穩(wěn)定性和耐用性比較好。

 

       特別需要注意的是，這里的標(biāo)曲每一個(gè)點(diǎn)都是需要空白基質(zhì)進(jìn)行處理，譜育科技在待測(cè)品種的空白基質(zhì)基礎(chǔ)上建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)曲本身就可體現(xiàn)方法檢測(cè)能力。

 

       方法和儀器檢出能力的判定

       據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度可見，采用LC-MS/MS法檢測(cè)氯唑磷時(shí)，如果1ng/ml的氯唑磷為定量下限，那么藥典限值相當(dāng)于定量下限的5~10倍，就能夠完全滿足需求。

       因此，以1ng/ml的氯唑磷的檢測(cè)靈敏度S/N>10為方法檢出能力評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，既滿足定量下限的需求，我們將氯唑磷的限值濃度置于標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間點(diǎn)，方法的穩(wěn)定性強(qiáng)和耐用性好，完全可以達(dá)到2020藥典對(duì)于方法檢出能力的要求。

 

       方法解讀二:

       空白基質(zhì)加標(biāo)建立標(biāo)曲的必要性—基質(zhì)增強(qiáng)（或抑制）

       在禁用農(nóng)殘檢測(cè)方法中，均采用基質(zhì)標(biāo)曲�？瞻谆�質(zhì)的加入能夠有效校正基質(zhì)對(duì)于儀器響應(yīng)的影響。以氯唑磷為例，10ppb的溶劑標(biāo)的響應(yīng)，響應(yīng)值為7.83*105CPS，10ppb的西洋參基質(zhì)標(biāo)的響應(yīng)， 響應(yīng)值為2.18*106CPS，可見此農(nóng)藥表現(xiàn)強(qiáng)勁的基質(zhì)增強(qiáng)效果。

 

       準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)

       由基質(zhì)效應(yīng)的影響可見，不同中藥的基質(zhì)對(duì)于同一種農(nóng)藥的影響會(huì)非常巨大。為了評(píng)價(jià)檢測(cè)可靠性，回收率考察中采用基質(zhì)標(biāo)曲的方法。根據(jù)藥典要求，加樣回收率應(yīng)在70%~120%之間，在滿足重復(fù)性的條件下，部分農(nóng)藥回收率放寬至60%~130%。